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3-磷酸甘油醛脱氢酶的测定实验
发布时间:2019-03-11   点击次数:25次
实验方法原理

GAPDH,D-磷酸甘油醛;NADP+ 氧化还原酶(磷酸化)。

 

D-3-磷酸甘油醛 + NAD? 1,3-磷酸甘油醛+ NADH + H

 

酶的实验既可以在正反应方向也可以在偶联后的逆反应方向进行。正反应中,必须加入不稳定且很昂贵的 DL-3-磷酸甘油酸。

实验材料

3-磷酸甘油醛脱氢酶溶液

试剂、试剂盒

三乙醇胺 · HCl DL-磷酸甘油酸 NAD+ 砷suan二氢钾

仪器、耗材

分光光度计

实验步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」

 

0.98 ml 实验混合物

 

0.02 ml 酶溶液

 

在 25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。

 

其他试剂:

0.1 mol/L 三乙醇胺 · HCl/NaOH pH 7.6(三乙醇胺 · HCl,Mr=185.7;溶解 18.6 g 于 800 ml H2O 中,用 1 mol/L NaOH 调节至 pH 7.6,补充到 1 L)

0.3 mol/L DL-磷酸甘油酸(Mr=170.1;不稳定,水状溶液 50 mg/ml)

0.1 mol/L NAD+(游离酸,Mr=663.4;663 mg 溶于 10 ml 水中)

0.1 mol/L 砷suan二氢钾(Mr=180.0;180 mg 溶于 10 ml 水中)

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