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荧光素酶和腔肠素Coelenterazine的选择及使用
发布时间:2019-10-29   点击次数:4次

荧光素酶

自然界中的荧光素酶:是自然界中能够产生荧光的酶的系统,如发光真菌,发光海星,发光鱼,发光节虫,发光甲虫等。

萤火虫荧光素酶:目前常用的萤火虫荧光素酶来源于北美萤火虫(Photinus pyralis),是一个61KDa的单体酶,无需表达后修饰,直接具有完全酶活性,反应需要底物荧光素以及ATP、氧气、镁离子等。

海肾荧光素酶:来源于海肾(Renilla reniformis),是一个36KDa的单体酶,表达后无需修饰,即可具有完全酶活,反应只需要腔肠素和O2参与。

Gussia荧光素酶:来源于海洋桡脚类生物Gaussia princeps,是一个19.9kDa单体酶,只有185个氨基酸,具有一个16aa 的分泌信号肽,可以被细胞分泌到细胞外,反应只需要腔肠素和O2参与。

腔肠素/Coelenterazine

美国Goldbio品牌的两种腔肠素,分别是天然腔肠素/Coelenterazine及其衍生物Coelenterazine 400a。

天然腔肠素/Coelenterazine:普 遍认为是天然的腔肠荧光素,是海肾荧光素酶(Rluc)的作用底物,具有许多用途。可用于检测活细胞中钙离子浓度,基因报告分析,BRET(生物发光共振 能量转移)研究,ELISA,HTS,组织或细胞中超氧阴离子和过亚硝酸盐的化学发光检测,在460-470nm之间发射荧光。分子式:C26H21N3O3 分子量: 423.48 g/mol ,纯度:95% ,保存:-15°C避光,保存在惰性气体下。
 


 


腔肠素400a/ Coelenterazine 400a: 是BRET研究中海肾荧光素酶(Rluc)的首shou底物,此腔肠素衍生物在390 nm和400nm之间发蓝色光,对GFP acceptor的光发射干扰最小。分子式:C26H21N3O 分子量:: 391.48 g/mol ,纯度:95%,保存:-15°C避光,保存在惰性气体下。

此外,Nanolight 除了提供天然腔肠素/Coelenterazine和Coelenterazine 400a,还提供体内实验用水溶性腔肠素,体外实验水溶性腔肠素,Coelenterazine h,Coelenterazine f,Coelenterazine e等。

还在为找不到水溶性腔肠素而烦恼吗?还在为溶解腔肠素的溶剂对动物的毒害而烦恼吗?下面介绍的水溶性腔肠素,将解决您的烦恼!

体内实验水溶性腔肠素/Water-soluble Coelenterazine (CTZ-SOL) for in vivo use:腔 肠素用于体内成像研究时通常是结合其他醇类溶解在丙二醇或甲醇中。大剂量的静脉注射丙二醇在短时间内即可产生毒性,包括高渗透压,增加阴离子间隙代谢性酸 中毒(由于乳酸中毒),急性肾损伤,似败血症综合症。

而使用水溶性腔肠素可以避免此类情况的发生,是制定的等渗透压,容易由肾脏分泌。因此除了重复静脉注 射,水溶性的腔肠素可以注入的浓度高达500µg/100µl ,在体内的腔肠素水平达到很高,并产生较高的Gaussia荧光素酶信号。成分:天然腔肠素 +用于水溶的无毒添加剂。

采用体内实验水溶性腔肠素优点:

1.无毒、等渗透压、无丙二醇、无酒精。

2.保质期长,密封在真空中。

555彩票网3.在无菌水中快速溶解。

4.低粘度,适合注射。

5.由于分装成等量小份因此能保证质量一致性(10 mg将被分装成20 份每份500 ug)。

体外实验水溶性腔肠素/Water-soluble Coelenterazine (CTZ-SOL) for in vitro use:成 分包括天热腔肠素+水溶添加剂,产品规格:215 ug/瓶,加入10ml水后终浓度是50uM,加入5ml水后终浓度是100 uM。储存:在密封状态下-80°C长期保存,-20°C短期保存,储存环境为干燥和黑暗。

使用:可根据您的需求添加水溶性缓冲溶液(如.PBS),涡旋 后,用分光光度记分析结果。产品优点:使用方便,无需先在乙醇中溶解。为达到zui优效果可以用不同的缓冲溶液溶解。

腔肠素h /Coelenterazine h:与Renilla荧光素酶或Gaussia荧光素酶使用具有一定的局限性。体外研究中比其他类似物更适合与钙离子激活发光蛋白共用。据报道,Coelenterazine h的发光强度高于天然腔肠荧光素10-20倍,因此是用来检测钙离子浓度微小变化的有力工具。

腔肠素f /Coelenterazine f: 腔肠素f与天然腔肠素的区别是氟取代了天然腔肠素R-1酚基上的羟基。当腔肠素f作用于分离的水母发光蛋白能够激活部分已氧化的腔肠素亚稳定复合物,与天 然腔肠素相比合成的复合物仅产生总量子数的80% 。

腔肠素f的优点:即需要更少的时间来形成发光蛋白复合物,这一般来说是非常慢的过程(天然腔肠素一般在60分钟内只能完成40%)。然而由于大量快速发 射光与钙离子有关,在同样的增长时间里发光蛋白复合物约产生多于20倍的信号且与天然腔肠素一样产生更少的完全相同的发射光谱。

e-Coelenterazine/腔肠素e:一种天然腔肠素衍生物,结构上比天然腔肠素多了一个乙基,形成了一个额外的环。作为海肾荧光素酶的底物,其荧光强度是天然腔肠素的137%,其初始荧光强度是天然腔肠苏素的750%。

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