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发光显色试剂盒如何正确操作?
发布时间:2019-12-17   点击次数:27次
       发光显色试剂盒是免疫印迹中,发光底物显色的方法之一,适用于PVDF膜,不推荐用于硝酸纤维素膜。为了让新手更好地学会如何使用,下面我们来仔细说说。
  发光显色试剂盒的正确操作步骤:
  1、临用前,取适量的A1和A2,等量混合后获得Dioxetane Buffer。
  2、按2.5mgAMPPD溶于25ml Dioxetane Buffer, 配制0.1mg/ml AMPPD底物溶液即为AMPPD Dioxetane Buffer(发色发光显迹液),用于膜的染色。
  3、取适量Dioxetane Buffer洗膜两次,每次15min。
  4、对于PVDF膜进行的碱性磷酸酶反应, 膜置于新鲜配制的AMPPD Dioxetane Buffer 作用5min。
  5、将膜移入适量的AMPPD Dioxetane Buffer中,浸泡5min(AP反应)。
  6、取出PVDF膜,滴干水分,将膜正面朝下放在一张透明的塑料保鲜膜上,向后折叠将膜包裹起来,成为不漏水的封闭体。
  7、在暗房中,将膜正面朝下放在感光胶片上,曝光数秒至数小时。
  8、如需要,在室温下以适量的TBS洗膜15min。
  9、将膜放入AMPPD Dioxetane Buffer,条带应在10~30min内出现。
  10、用蒸馏水洗膜,终止反应。晾干后拍照留*的记录。
  以上就是发光显色试剂盒的正确操作步骤,希望能帮助大家更好地使用发光显色试剂盒。

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